1. Osztályozás
A gélelektroforézist vertikális típusokra (beleértve az oszlopgéleket és a lemezzseléket) és vízszintes típusokra (főleg a lemezgélekre) osztják (6-18. ábra). Általában a függőleges elválasztás valamivel jobb, mint a vízszintes, de a vízszintes gélkészítésnek legalább négy előnye van: a teljes gél alatt támaszték van, amely lehetővé teszi az alacsony koncentrációjú agaróz használatát; különböző specifikációjú agaróz géllemezek készíthetők; a gél előkészítése és a minta betöltése kényelmesebb; az elektroforézis kamra könnyen megépíthető és költséghatékony. Mivel a vízszintes elektroforézist úgy hajtják végre, hogy az agaróz géllemezt az elektroforézispuffer felszíne alá kb. 1 mm-rel teljesen alámerítik, ezt víz alatti elektroforézisnek is nevezik.
DYCP-31DN elektroforézis tartály agaróz gél elektroforézishez
2. Pufferrendszer
A nukleinsav-leválasztás során a legtöbb rendszer folyamatos rendszert alkalmaz. Az általánosan használt elektroforézis pufferek közé tartozik a TBE (0,08 mol/l Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/l bórsav, 0,0024 mol/l EDTA) és a THE (0,04 mol/l Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/l). nátrium-acetát, 0,0018 mol/l EDTA) puffer. Ezeket a puffereket általában 10-szeres törzsoldatként készítik, és használat közben a szükséges koncentrációra hígítják. A lineáris és cirkuláris DNS migrációs sebessége az agaróz gélben az alkalmazott puffertől függően változik. A THE pufferben a lineáris DNS migrációs sebessége nagyobb, mint a cirkuláris DNS-é, míg a TBE pufferben ennek az ellenkezője igaz.
3.Agarose gél készítése
(1) Horizontális agaróz gél készítése
(a) Készítse elő a szükséges koncentrációjú agaróz gélt 1x elektroforézis pufferrel.
b) Az agarózt forró vízfürdőben, mágneses keverőn vagy mikrohullámú sütőben melegítsük fel teljesen feloldódásig. Hűtsük le az agaróz oldatot 55 °C-ra, és adjunk hozzá etidium-bromid (EB) festéket 0,5 μg/ml végső koncentrációig.
(c) Zárja le az üveg- vagy akrillemezek széleit kis mennyiségű agaróz géllel, adjon hozzá egy fésűt, és helyezze a fésűfogakat körülbelül 0,5–1,0 mm-rel a lemez fölé.
(d) Az olvadt agaróz gél oldatot folyamatosan öntse az üveg vagy akrillemez formába (a vastagsága a DNS minta térfogatától függ), elkerülve a légbuborékok bejutását. Hagyja szobahőmérsékleten természetes módon megszilárdulni.
(e) A teljes megszilárdulás után óvatosan távolítsa el a fésűt. Adjon megfelelő mennyiségű elektroforézis puffert a géltartályba, ügyelve arra, hogy a géllemez körülbelül 1 mm-rel az elektroforézispuffer felszíne alá kerüljön.
(2) Függőleges agaróz gél készítése
a) Távolítsa el a zsírt vagy a maradékot az üveglapokról etanolos mosással.
(b) Helyezzen távtartó lemezeket az elülső és hátsó gátak közé, igazítsa a távtartó lemezek széleit az első és hátsó gáthoz, és rögzítse őket bilincsekkel.
(c) Adjon 2% agarózt 1x pufferben a távtartó lemezek szélei közé, hogy 1 cm magas agarózdugót képezzen a gélöntő kamra alján.
(d) Öntse a megolvasztott agarózgélt a kívánt koncentrációban, 1x pufferben elkészítve a gélkamrába a teteje alatt legfeljebb 1 cm-rel.
(e) Helyezze be a fésűt, elkerülve a légbuborékok beszorulását a fésű fogai alá. Néha ráncok jelenhetnek meg a fésűfogakon az agaróz gél hűtése során; ilyenkor egyszerűen tegyünk a tetejére egy kis olvasztott agarózt, hogy megszilárduljon.
(f) Távolítsa el a fésűt. A betöltőnyílásban a puffer szivárgásának elkerülése érdekében tömítse le az agaróz géllemez és az elektroforéziskamra közötti kapcsolatot 2%-os agarózzal, és adja hozzá a szükséges puffermennyiséget.
(g) Adjon 1x elektroforézis puffert a gélkamrához.
(h) Óvatosan töltse fel a DNS-mintákat a puffer alatti agarózgélre.
Az agaróz gél elektroforézissel kapcsolatos alapismeretekről a jövő héten osztunk meg további információkat. Kívánom, hogy ezek az információk hasznosak legyenek a kísérletben.
A Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) több mint 50 éve specializálódott elektroforézis-műszerek gyártására saját professzionális műszaki csapatunkkal és K+F központunkkal. Megbízható és teljes gyártósorral rendelkezünk a tervezéstől az ellenőrzésig, és raktárral, valamint marketing támogatással. Fő termékeink az elektroforézis cella (tartály/kamra), elektroforézis tápegység, kék LED átvilágító, UV átvilágító, gél kép- és elemző rendszer stb.
Most partnereket keresünk, mind az OEM elektroforézis tartályt, mind a forgalmazókat szeretettel várjuk.
Ha bármilyen vásárlási terve van termékeinkkel kapcsolatban, kérjük, ne habozzon kapcsolatba lépni velünk. Üzenetet küldhet nekünk e-mailben[e-mail védett]vagy[e-mail védett], vagy hívjon minket a +86 15810650221 telefonszámon, vagy adja hozzá a Whatsapp +86 15810650221 számot, vagy a Wechat: 15810650221 telefonszámot.
Kérjük, olvassa be a QR-kódot, hogy hozzáadja a Whatsapphoz vagy a WeChathoz.
Feladás időpontja: 2023. december 07