Az agaróz gél elektroforézis alapvető technikái (2)

Mintaelőkészítés ésTerhelés

A legtöbb esetben a folyamatos, egymásra rakódó gél nélküli pufferrendszer alkalmazása miatt a mintáknak megfelelő koncentrációjúnak és kis térfogatúnak kell lenniük. Használja apipettalassan adagoljuk a mintát, üregenként 5-10 μg-mal, hogy elkerüljük a felbontás jelentős csökkenését. Amikorminta betöltése, az áramellátást ki kell kapcsolni. A mintának tartalmaznia kell indikátorfestéket (0,025% brómfenol kék vagy narancs) és szacharózt (10-15%) vagy glicerint (5-10%) a sűrűség növelése, a minta koncentrálása és a diffúzió megakadályozása érdekében. Azonban néha a szacharóz vagy glicerin U-alakú sávokat okozhat az elektroforézis eredményeiben, ami elkerülhető 2,5%-os Ficoll (polivinilpirrolidon) használatával.

1

Elektroforézis

Az elektroforézis feszültsége 5-15 V/cm, általában 10 V/cm körüli. A nagy molekulák szétválasztásához a feszültségnek alacsonyabbnak kell lennie, általában nem haladhatja meg az 5 V/cm-t.

2

Festés

A fluoreszcens festéket, az etidium-bromidot (EB) általában festésre használják, hogy megfigyeljék a DNS-sávokat az agaróz gélben. Az EB beépülhet a DNS-molekulák bázispárjai közé, így az EB a DNS-hez kötődik. A 260 nm-es ultraibolya fény DNS általi abszorpciója átkerül az EB-re, és a kötött EB 590 nm-en fluoreszcenciát bocsát ki a látható fény spektrumának vörös-narancssárga tartományában. A gélt 1 mmol/l MgSO4 oldatban 1 órán át festve csökkentheti a nem kötött EB által okozott háttérfluoreszcenciát, ami megkönnyíti a kis mennyiségű DNS kimutatását.

Az EB festéknek több előnye is van: könnyen használható, nem bontja le a nukleinsavakat, nagy az érzékenysége, képes megfesteni a DNS-t és az RNS-t is. Az EB bármikor hozzáadható a mintához, és UV-elnyelés segítségével nyomon követhető. A festés után az EB n-butanollal történő extrakcióval eltávolítható.

Az EB-festék azonban erős mutagén, és a kezelés során óvintézkedéseket kell tenni, például polietilén kesztyűt kell viselni. Az akridinnarancs is gyakran használt festék, mert képes megkülönböztetni az egyszálú és a kétszálú nukleinsavakat (DNS, RNS). Zöld fluoreszcenciát (530 nm) mutat a kétszálú nukleinsavak és vörös fluoreszcenciát (640 nm) az egyszálú nukleinsavak esetében. Ezenkívül más színezékek, például metilénkék, metilénzöld és kinolin B is használhatók a festéshez.

A Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) több mint 50 éve specializálódott elektroforézis-műszerek gyártására saját professzionális műszaki csapatunkkal és K+F központunkkal. Megbízható és teljes gyártósorral rendelkezünk a tervezéstől az ellenőrzésig, és raktárral, valamint marketing támogatással. Fő termékeink az elektroforézis cella (tartály/kamra), elektroforézis tápegység, kék LED átvilágító, UV átvilágító, gél kép- és elemző rendszer stb.

3

Most partnereket keresünk, mind az OEM elektroforézis tartályt, mind a forgalmazókat szeretettel várjuk.

Ha bármilyen vásárlási terve van termékeinkkel kapcsolatban, kérjük, ne habozzon kapcsolatba lépni velünk. Üzenetet küldhet nekünk e-mailben[e-mail védett]vagy[e-mail védett], vagy hívjon minket a +86 15810650221 telefonszámon, vagy adja hozzá a Whatsapp +86 15810650221 számot, vagy a Wechat: 15810650221 telefonszámot.

Kérjük, olvassa be a QR-kódot, hogy hozzáadja a Whatsapphoz vagy a WeChathoz.

2


Feladás időpontja: 2023. december 20