Alapelv
A cellulóz-acetát film elektroforézis egy olyan elektroforézis módszer, amely cellulóz-acetát filmet használ hordozóként. Elektroforézisnek nevezzük azt a jelenséget, amikor a töltött részecskék elektromos tér hatására a szemközti elektród felé mozognak. Mivel minden fehérjének van egy meghatározott izoelektromos pontja, ha egy fehérjét olyan oldatba helyeznek, amelynek pH-ja alacsonyabb, mint az izoelektromos pontja, a fehérje pozitív töltésű lesz, és a negatív elektród felé mozog. Éppen ellenkezőleg, a pozitív pólusra mozog. Mivel az elektromos térben mozgó fehérjemolekulák sebessége összefügg a töltésükkel, a molekulák alakjával és méretével, ezért a különböző fehérjék elektroforézissel szétválaszthatók. A szérum különféle fehérjéket tartalmaz, amelyek mindegyikének izoelektromos pontja 7,5 vagy alacsonyabb pH-értéken van. Amikor a szérumot pH 8,6-os pufferbe helyezzük az elektroforézis futtatásához, minden szérumfehérje negatív töltésű, és az elektromos térben a pozitív oldal felé mozog. Mivel a különböző szérumfehérjék különböző töltésűek azonos pH mellett, a molekuláris részecskék eltérő méretűek, így a migrációs sebesség is eltérő, és elektroforézissel elválasztják őket. A szérumfehérjék izoelektromos pontjait és molekulatömegét az alábbi táblázat mutatja:
| Fehérje | Izoelektromos pontok (PI) | Molekulatömeg |
| Albumin | 4.88 | 69 000 |
| α1-glulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-glulin | 5.06 | 300 000 |
| β-gluulin | 5.12 | 9 000-150 000 |
| γ-gluulin | 6,85-7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
A kísérlet célja a különböző fehérjék elkülönítése a vérszérumban cellulóz-acetát membránnal (röv. CAM) hordozó közegként. A CAM egyfajta habosított loosejó egyenletes film, vastagsága 0,1-1,5 mm, amely bizonyos vízfelvétellel rendelkezik.
Anyagok, műszerek és reagensek CAM-elektroforézishez
Minták:egészséges emberi vérszérum
Eszköz:tápegység DYY-6C, elektroforézis tartály DYCP-38C, kiváló mintatöltés WD-9404
A reagensek
1) cellulóz-acetát membrán 7x9 cm
2) PH 8,6 barbitol pufferoldat (ionerőssége 0,05-0,09, ez 0,06 háromszori idő): vegyen be 1,84 g dietil-barbitursavat, majd vegyen be 1,03 g dietil-nátrium-pentobarbitált, adjon hozzá egy kevés desztillált vizet, hogy feloldódjon, és melegítse fel. 1000 ml-ig;
3) Folt: Ponceau S 0,2 g, triklór-ecetsav 3 g, adjunk hozzá 100 ml desztillált vizet;
4) TBS/T vagy PBS/T: 45 ml 95%-os etanol, 5 ml jégecet, adjunk hozzá 50 ml desztillált vizet;
5) Tisztítóoldat: 70 ml vízmentes etanol, 30 ml jégecet.
Experiment Method
1) Készítse elő a membránt: Merítse a membránt a barbitol pufferoldatba 30 perc-8 órára, és vegye ki, a felesleges oldatot nedvszívó papírral távolítsa el.
2) Minták betöltése: Különböztesse meg a membrán durva és sima oldalát, és jelöljön meg egy vonalat 1,5 cm-re a felső végétől a durva oldalon. Töltsön be mintákat kiváló mintabetöltő szerszámmal a durva oldalon. Megjegyzés: A mintákat a membrán durva oldalára kell helyezni. Miután a szérumminták teljesen behatoltak a membránba, fordítsa meg a membránt, tegye a durva oldalát (a mintákkal) lefelé a tartályba, és a mintákat tartalmazó végét helyezze a negatív elektródába.
3) Elektroforézis: Kapcsolja be a tápegységet, 0.4～0,6 m A/cm membrán, a működési idő 30-45 perc. Az elektroforézis futtatása után kapcsolja ki a készüléket.
4) Befestés és tisztítás: Vegye ki a membránt a tartályból, és merítse beleit 5 percig a festékoldatba, majd a tisztítóoldatban újra és újra 3-4 alkalommal tisztítsa, amíg a háttér színe kitisztul. A szérumfehérjéket fel kell tüntetni a sávokon, és általában öt zóna van, amelyek a megjelölt vonal felső végét alkotják, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Tartósítás: tegye a száraz elektroforézistzenekartisztító oldatban 10-15 percig, majd kivesszük és tiszta üvegre ragasszuk, száradás után átlátszó film lesz belőlezenekar.
KísérletEredmény
A szérumminták elválasztó hatása jó, és nincs sávos farokjelenség. Az eredmények megismételhetősége a vizsgálati eljárások és a kísérletező módszerei miatt változó, az ismételhetőség magas.
Következtetés
A gyors klinikai elektroforézis detektáló rendszer (Elektroforézis tartályDYCP-38C,tápegységDYY-6C és kiváló mintaterhelésű WD-9404) általunk gyártottcég Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdmegfelel a kísérleti követelményeknek,ésaz eredmények reprodukálhatók, egyszerűek és gyorsak, alkalmasaktanításkutatás.
Peking LiuyiA Biotechnology Co., Ltd. elektroforézis termékek gyártására specializálódott élettudományi ipar számára, amelytöbb mint 50 éves múltra tekint vissza Kínában, és a vállalat stabil és kiváló minőségű termékeket tud nyújtani a világ minden tájáról. Évek óta tartó fejlesztés során érdemes választani!
Most partnereket keresünk, mind az OEM elektroforézis tartályt, mind a forgalmazókat szeretettel várjuk.
Ha többet szeretne megtudni rólunk, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot e-mailben[e-mail védett]vagy[e-mail védett].
Feladás időpontja: 2022. november 14