A múlt héten több szempontot is megosztottunk a cellulóz-acetát membrán elektroforézis használatával kapcsolatban, és ma itt befejezzük ezt a témát referenciaként.
Válogatás a Pufferkoncentráció
A cellulóz-acetát membránelektroforézisben alkalmazott pufferkoncentráció általában alacsonyabb, mint a papírelektroforézisnél.Az általánosan használt pH 8,6BAz arbitális puffert jellemzően 0,05 mol/l és 0,09 mol/l közötti tartományban választják meg.A koncentráció kiválasztásakor előzetes meghatározás történik.Például, ha az elektroforéziskamrában az elektródák közötti membráncsík hossza 8-10 cm, akkor a membránhossz centiméterére 25 V feszültségre van szükség, és az áramerősségnek 0,4-0,5 mA-nek kell lennie a membránszélesség centiméterére vonatkoztatva.Ha ezeket az értékeket nem érik el vagy lépik túl az elektroforézis során, a pufferkoncentrációt növelni vagy hígítani kell.
A túl alacsony pufferkoncentráció a sávok gyors mozgását és a sávszélesség növekedését eredményezi.Másrészt a túl magas pufferkoncentráció lelassítja a sávok migrációját, megnehezítve bizonyos elválasztó sávok megkülönböztetését.
Meg kell jegyezni, hogy a cellulóz-acetát membrán elektroforézis során az áram jelentős része a mintán keresztül vezet, ami jelentős hőmennyiséget termel.Néha a választott pufferkoncentráció megfelelőnek tekinthető.Megnövekedett környezeti hőmérséklet vagy nagyobb feszültség esetén azonban felerősödhet a víz hő hatására bekövetkező párolgása, ami túlzottan magas pufferkoncentrációt, sőt a membrán kiszáradását is okozhatja.
Minta kötet
A cellulóz-acetát membrán elektroforézis során a minta térfogatát különböző tényezők határozzák meg, beleértve az elektroforézis körülményeit, magának a mintának a tulajdonságait, a festési módszereket és a kimutatási technikákat.Általános elv, hogy minél érzékenyebb a kimutatási módszer, annál kisebb lehet a minta térfogata, ami előnyös az elválasztás szempontjából.Ha a minta térfogata túl nagy, előfordulhat, hogy az elektroforetikus elválasztási minták nem egyértelműek, és a festés is időigényes lehet.Az elválasztott festett sávok elúciós kolorimetriás detektálási módszerekkel történő kvantitatív elemzésekor azonban a minta térfogata nem lehet túl kicsi, mert ez bizonyos komponensek esetében alacsonyabb abszorbancia értékeket eredményezhet, ami nagyobb hibákhoz vezethet a tartalom kiszámításában.Ilyen esetekben a minta térfogatát megfelelően növelni kell.
A mintafelhordó vonal minden centiméterére hozzáadott minta térfogata jellemzően 0,1 és 5 μL között van, ami 5 és 1000 μg közötti mintamennyiségnek felel meg.Például a rutin szérumfehérje elektroforézis analízis során a felhordási vonal minden centiméterére hozzáadott minta térfogata általában nem haladja meg az 1 μL-t, ami 60-80 μg fehérjének felel meg.Ha azonban lipoproteineket vagy glikoproteineket elemeznek ugyanazzal az elektroforézis módszerrel, a minta térfogatát ennek megfelelően növelni kell.
Összefoglalva, a legmegfelelőbb mintatérfogatot speciális körülmények alapján kell kiválasztani előzetes kísérletsorozaton keresztül.
A festőoldat kiválasztása
A cellulóz-acetát membránelektroforézis során elválasztott sávokat jellemzően a kimutatás előtt megfestik.A különböző mintakomponensek eltérő festési módszereket igényelnek, és a cellulóz-acetátos membránelektroforézisre alkalmas festési módszerek nem feltétlenül alkalmazhatók teljesen szűrőpapírra.
Három fő alapelv alapján kell festési megoldást választanicellulóz-acetát membrán.Először,A vízben oldódó festékeket előnyben kell részesíteni az alkoholban oldódó festékekkel szemben, hogy elkerüljük a membrán zsugorodását és az utóbbi festőoldata által okozott deformációt.A festés után fontos, hogy a membránt vízzel öblítse le, és minimalizálja a festés időtartamát.Ellenkező esetben a membrán felpöndörödhet vagy összezsugorodhat, ami befolyásolhatja a későbbi észlelést.
Másodszor, előnyösebb olyan festékeket választani, amelyek erős festési affinitással rendelkeznek a mintához.Szérumfehérjék cellulóz-acetát membránelektroforézisében általánosan használt aminofekete 10B, mivel erős festési affinitása a különböző szérumfehérje-komponensekhez és stabilitása.
Harmadszor, megbízható minőségű festékeket kell választani.Egyes festékek, annak ellenére, hogy ugyanaz a neve, szennyeződéseket tartalmazhatnak, amelyek a festés után különösen sötét hátteret eredményeznek.Ez még az eredetileg jól elkülönülő sávokat is elmoshatja, így nehéz megkülönböztetni őket.
Végül fontos a festőoldat koncentrációjának megválasztása.Elméletileg úgy tűnhet, hogy a magasabb festőoldat-koncentráció a mintakomponensek alaposabb festését és jobb festési eredményeket eredményez.Ez azonban nem így van.A mintakomponensek és a festék közötti kötődési affinitásnak van egy bizonyos határa, amely nem növekszik a festőoldat koncentrációjának növekedésével.Éppen ellenkezőleg, a túlzottan magas festőoldat-koncentráció nemcsak a festéket pazarolja, hanem megnehezíti a tiszta háttér elérését is.Ezen túlmenően, amikor a színintenzitás elér egy bizonyos maximális értéket, a festék abszorbanciagörbéje nem követ lineáris összefüggést, különösen a kvantitatív méréseknél. A cellulóz-acetát membránelektroforézisben a festőoldat koncentrációja általában alacsonyabb, mint a papírelektroforézisnél.
Tudnivalók a pekingi Liuyi biotechnológiáról's cellulóz-acetát membránelektroforézis tartály és elektroforézis alkalmazása, kérjük, látogasson el ide:
lKísérlet a szérumfehérje elválasztására cellulóz-acetát membránnal
lCellulóz-acetát membrán elektroforézis
lSzámos szempontot kell szem előtt tartani a cellulóz-acetát membránelektroforézis alkalmazásakor (1)
Ha bármilyen vásárlási terve van termékeinkkel kapcsolatban, kérjük, ne habozzon kapcsolatba lépni velünk.Üzenetet küldhet nekünk e-mailben[e-mail védett]vagy[e-mail védett], vagy hívjon minket a +86 15810650221 telefonszámon, vagy adja hozzá a Whatsapp +86 15810650221 számot, vagy a Wechat: 15810650221 telefonszámot.
Referencia:Elektroforézis (második kiadás), Mr. Li
Feladás időpontja: 2023-06-06