Poliakrilamid gél elektroforézis
A gélelektroforézis alapvető technika a biológiai tudományágak laboratóriumaiban, lehetővé téve makromolekulák, például DNS, RNS és fehérjék elválasztását.A különböző elválasztó közegek és mechanizmusok lehetővé teszik e molekulák részhalmazainak hatékonyabb elválasztását fizikai jellemzőik kihasználásával.Különösen a fehérjék esetében a poliakrilamid gélelektroforézis (PAGE) gyakran a választott technika.
A PAGE egy olyan technika, amely elválasztja a makromolekulákat, például a fehérjéket elektroforetikus mobilitásuk alapján, vagyis az analitok azon képessége alapján, hogy az ellentétes töltésű elektródák felé mozogjanak.A PAGE-ban ezt a molekula töltése, mérete (molekulatömege) és alakja határozza meg.Az analitok a poliakrilamid gélben kialakított pórusokon keresztül mozognak.A DNS-től és az RNS-től eltérően a fehérjék töltése a beépült aminosavaktól függően változik, ami befolyásolhatja működésüket.Az aminosavsorok másodlagos struktúrákat is képezhetnek, amelyek befolyásolják látszólagos méretüket, és ennek következtében azt, hogy hogyan tudnak áthaladni a pórusokon.Ezért néha kívánatos lehet a fehérjék denaturálása az elektroforézis előtt linearizálni őket, ha pontosabb méretbecslésre van szükség.
SDS OLDAL
A nátrium-dodecil-szulfát poliakrilamid gélelektroforézis egy olyan technika, amelyet 5-250 kDa tömegű fehérjemolekulák elkülönítésére használnak.A fehérjéket kizárólag molekulatömegük alapján választják el.A gélek készítésénél nátrium-dodecil-szulfátot, egy anionos felületaktív anyagot adnak hozzá, amely elfedi a fehérjeminták belső töltéseit, és hasonló töltés/tömeg arányt biztosít.Egyszerűen fogalmazva, denaturálja a fehérjéket, és negatív töltést ad nekik.
Natív OLDAL
A natív PAGE egy olyan technika, amely nem denaturált géleket használ a fehérjék elválasztására.Az SDS PAGE-tól eltérően a gélek elkészítéséhez nem adnak hozzá denaturálószert.Ennek eredményeként a fehérjék szétválása a fehérjék töltése és mérete alapján történik.Ebben a technikában a fehérjék konformációja, feltekeredése és aminosavláncai azok a tényezők, amelyektől az elválasztás függ.A fehérjék ebben a folyamatban nem károsodnak, és az elválasztás befejezése után visszanyerhetők.
Hogyan működik a poliakrilamid gélelektroforézis (PAGE)?
A PAGE alapelve az analitok szétválasztása egy poliakrilamid gél pórusain elektromos áram segítségével.Ennek elérése érdekében akrilamid-bizakrilamid keveréket polimerizálnak (poliakrilamid) ammónium-perszulfát (APS) hozzáadásával.A reakció, amelyet a tetrametil-etilén-diamin (TEMED) katalizál, hálószerű szerkezetet képez pórusokkal, amelyeken keresztül az analitok át tudnak mozogni (2. ábra).Minél nagyobb a gél teljes akrilamid százalékos aránya, annál kisebb a pórusméret, ennélfogva annál kisebb lesz a fehérjék átjutása.Az akrilamid és a biszakrilamid aránya szintén befolyásolja a pórusméretet, de ezt gyakran állandóan tartják.A kisebb pórusméretek csökkentik azt a sebességet is, amellyel a kis fehérjék képesek áthaladni a gélen, javítva a felbontásukat, és megakadályozva, hogy áram alkalmazásakor gyorsan lefolyjanak a pufferbe.
Berendezések poliakrilamid gél elektroforézishez
Gélelektroforézis cella (tartály/kamra)
A poliakrilamid gélelektroforézishez (PAGE) használt géltartály különbözik az agaróz géltartálytól.Az agaróz géltartály vízszintes, míg a PAGE tartály függőleges.Függőleges elektroforézis cellával (tartály/kamra) vékony gélt (általában 1,0 mm-es vagy 1,5 mm-es) öntünk két üveglap közé, és úgy rögzítjük, hogy a gél alja az egyik kamrában lévő pufferbe, a teteje pedig pufferbe merüljön. egy másik kamrában.Áram alkalmazásakor kis mennyiségű puffer vándorol a gélen keresztül a felső kamrából az alsó kamrába.Az erős bilincsekkel, amelyek garantálják, hogy a szerelvény függőleges helyzetben marad, a berendezés gyors gélfutást tesz lehetővé egyenletes hűtéssel, ami különálló sávokat eredményez.
A Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) különféle méretű poliakrilamid gélelektroforézis cellákat (tartályok/kamrák) gyárt.A DYCZ-20C és DYCZ-20G modellek függőleges elektroforézis cellák (tartályok/kamrák) DNS szekvenálási elemzéshez.Egyes függőleges elektroforézis cellák (tartályok/kamrák) kompatibilisek a blottoló rendszerrel, mint például a DYCZ-24DN, DYCZ-25D és DYCZ-25E modellek kompatibilisek a DYCZ-40D, DYCZ-40G és DYCZ-40F típusú Western Blotting rendszerrel, amelyeket a fehérjemolekula gélről a membránra történő átvitelére használnak.Az SDS-PAGE elektroforézis után a Western-blot módszer egy specifikus fehérje kimutatására fehérjekeverékben.Ezeket a blottoló rendszereket a kísérleti követelményeknek megfelelően választhatja ki.
Elektroforézis tápegység
A gél futtatásához szükséges áram biztosításához elektroforézises tápegységre lesz szüksége.A Liuyi Biotechnologynál elektroforézises tápegységek széles választékát kínáljuk minden alkalmazáshoz.A nagy stabil feszültséggel és árammal rendelkező DYY-12 és DYY-12C modellek megfelelnek a nagy feszültségigényű elektroforézisnek.Állvány, időzítés, VH és lépésről lépésre történő alkalmazás funkcióval rendelkezik.Ideálisak IEF és DNS szekvenálási elektroforézis alkalmazásokhoz.Általános fehérje- és DNS-elektroforézis-alkalmazásunkhoz a DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 stb. modellek állnak rendelkezésre, amelyek egyben forró értékesítési tápegységek elektroforézis cellákkal (tartályok/kamrák).Ezek közép- és kisfeszültségű elektroforézis alkalmazásokhoz használhatók, például iskolai laborban, kórházi laborban stb.További tápegység-modellekért látogassa meg weboldalunkat.
A Liuyi márka több mint 50 éves múltra tekint vissza Kínában, és a vállalat stabil és kiváló minőségű termékeket tud kínálni a világ minden táján.Évek óta tartó fejlesztésnek köszönhetően megérdemli a választást!
Ha többet szeretne megtudni rólunk, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot e-mailben[e-mail védett] or [e-mail védett].
Irodalom: Mi a poliakrilamid gélelektroforézis?
1. Karen Steward PhD poliakrilamid gél elektroforézis, hogyan működik, technikák változatai és alkalmazásai
Feladás időpontja: 2022. május 23